Yaqinda odamlarning turli yuqumli kasalliklarini tashxislashning ishonchli, yuqori sezgir va tezkor usuli ishlab chiqildi. Ushbu usul "PCR tahlili" deb ataladi. Bu nima, uning mohiyati nima, u qanday mikroorganizmlarni ochib berishi mumkin va uni qanday qilib to'g'ri qabul qilish kerak, biz maqolamizda aytib beramiz.
Kashfiyot tarixi
Polimeraza zanjiri reaktsiyasi (PCR) usulini 1983 yilda amerikalik olim Kari Mullis ixtiro qilgan. Dastlab diagnostika usuli uning yaratuvchisi ishlagan Cetus korporatsiyasi tomonidan patentlangan. Ammo 1992 yilda barcha huquqlar va patentlar Hoffman-La Rochega sotildi. Shundan so'ng, shunga o'xshash tadqiqotlar parallel ravishda amalga oshirilgani va Elis Chen, Devid Edgar, Jon Trell kabi boshqa amerikalik biologlar tomonidan qayd etilgani ma'lum bo'ldi. 1980 yilda sovet olimlari A. Slyusarenko, A. Kaledin va S. Gorodetskiylar ham bu muammo bilan shug'ullanganlar. Shuning uchun mualliflik huquqining yagona egasini aniqlashning iloji bo'lmadi. Ko'pgina taniqli biokimyogarlar polimeraza zanjiri reaktsiyasi texnikasining rivojlanishiga ma'lum hissa qo'shdilar va o'zlarining yangiliklarini patentladilar. Hozirgi vaqtda tahlilPCR hamma joyda maxsus jihozlangan laboratoriyalarda amalga oshiriladi.
PCR diagnostika usulining mohiyati
PCR tahlili: bu nima va u qanday ishlaydi? Usulning mohiyati maxsus DNK polimeraza fermenti yordamida sun'iy sharoitda ma'lum bir mikrobial muhit hajmini oshirishdan iborat. Buning uchun mavjud DNK materiali ko'p marta ko'paytiriladi. Shunday qilib, namunada patogen mikroorganizm mavjud bo'lsa, biokimyoviy laboratoriya manipulyatsiyasi tufayli uning miqdori ortadi va mikroskop ostida bakteriyani aniqlash qiyin bo'lmaydi.
Material tadqiqot qanday amalga oshiriladi?
Tahlil uchun zarur:
- DNK matritsasi;
- materialning uchlarini birlashtiruvchi primerlar;
- issiqlikka chidamli DNK polimeraza fermenti;
- fermentlarning to'g'ri ishlashini ta'minlaydigan kimyoviy moddalar;
- DNK materialining oʻsishi va rivojlanishi uchun tegishli sharoitlar yaratish uchun zarur boʻlgan bufer eritmasi.
PZRni amalga oshirish uchun uch bosqichdan iborat 25-30 marta takrorlanadi: denaturatsiya, yumshatish va cho'zish.
Polimer zanjir reaktsiyasini tahlil qilish uchun maxsus qurilma - kuchaytirgich ishlatiladi. Zamonaviy uskunalar diagnostika vaqtidagi xatolarni bartaraf etish uchun quvurlarni isitish va sovutish uchun kerakli dasturni o'rnatish imkonini beradi.
Diagnostika qayerda ishlatiladi?
Polimer zanjirli reaksiya usuli tibbiyotning turli sohalarida qoʻllaniladi:
- kriminalistlar bilanu soch, tupurik yoki qon kabi genetik materialni aniqlaydi;
- PCR qon testi genotiplashda, masalan, ma'lum bir doriga individual genetik xos reaktsiyani aniqlashda yordam beradi;
- bu usuldan odamlar oʻrtasida oilaviy aloqalar mavjudligini aniqlash uchun foydalanish;
- Tibbiy diagnostikada turli yuqumli kasalliklarni aniqlash uchun eng mashhur PCR usuliga aylandi.
PCR qanday infektsiyalarni aniqlaydi?
Demak, tibbiyot uzoq vaqtdan beri PCR tahlilini muvaffaqiyatli qoʻllagan. Bu nima, biz allaqachon bilamiz. Va u bilan qanday patogenlarni aniqlash mumkin? Quyidagi yuqumli kasalliklar PCR usuli bilan aniqlanadi:
- gepatit A, B, C;
- ureaplazmoz;
- kandidoz;
- xlamidiya;
- mikoplazmoz;
- gardnerellyoz;
- yuqumli mononuklyoz;
- trichomoniasis;
- papillomavirus infektsiyasi;
- sil;
- gerpes infektsiyasining 1 va 2 turlari;
- helikobakterioz;
- sitomegalovirus;
- difteriya;
- salmonellyoz;
- OIV infektsiyasi.
Shuningdek, saraton tashxisida PCR usullari qo'llaniladi.
Usulning afzalliklari
PCR diagnostikasi bir qancha afzalliklarga ega:
- Yuqori sezuvchanlik. Mikroorganizm DNK ning faqat bir nechta molekulalari mavjudligida ham, PCR tahlili infektsiyaning mavjudligini aniqlaydi. Usul surunkali va yashirin kasalliklarga yordam beradi. Ko'pincha bunday hollarda mikroorganizmaks holda ekish mumkin emas.
- Tadqiqot uchun har qanday material mos keladi, masalan, tupurik, qon, genital sekretsiya, soch, epiteliya hujayralari. Eng keng tarqalgani bu PCR uchun qon va urogenital smear tahlilidir.
- Uzoq muddatli hosil talab qilinmaydi. Avtomatlashtirilgan diagnostika jarayoni tadqiqot natijalarini 4-5 soatdan keyin olish imkonini beradi.
- Usul deyarli 100% ishonchli. Faqat yolgʻon salbiy natijalarning alohida holatlari qayd etilgan.
- Bir material namunasidan bir necha turdagi patogenlarni aniqlash qobiliyati. Bu nafaqat kasallikni tashxislash jarayonini tezlashtiradi, balki moddiy xarajatlarni sezilarli darajada kamaytiradi. Ko'pincha shifokor keng qamrovli PCR tahlilini belgilaydi. Oltita patogenni aniqlashdan iborat bo'lgan ekspertiza narxi taxminan 1500 rublni tashkil qiladi.
Tahlilga tayyorgarlik koʻrish boʻyicha tavsiyalar
PZR tadqiqotida natijalar ishonchli boʻlishi uchun diagnostikaga dastlabki tayyorgarlik boʻyicha tavsiyalarga amal qilgan holda testdan oʻtishingiz kerak:
- Tupurik berishdan oldin namuna olishdan 4 soat oldin ovqat eyishdan va dori-darmonlarni qabul qilishdan bosh tortishingiz kerak. Jarayon oldidan darhol og'zingizni qaynatilgan suv bilan yuving.
- Yonoqning ichki yuzasidan namuna olishda ham yuqoridagi qoidalarga amal qilish kerak. Yuvishdan keyin bez sekretsiyasini ta'kidlash uchun terini engil massaj qilish tavsiya etiladi.
- Siydik odatda uyda olinadi. Buning uchun siz yaxshilab hojatxonani o'tkazishingiz kerakjinsiy a'zolar. Steril plastik idishda 50-60 ml siydik to'plang. Materialning tozaligini ta'minlash uchun ayollarga vaginaga tampon qo'yish, erkaklarga esa teri burmasini iloji boricha orqaga tortish tavsiya etiladi. Hayz paytida xayriya qilmang.
- Spermani berish uchun namuna olishdan oldin 3 kun davomida jinsiy aloqa qilishdan bosh tortish kerak. Shifokorlar, shuningdek, saunaga tashrif buyurishni va issiq hammomni qabul qilishni, spirtli ichimliklar va achchiq ovqatlarni ichishni maslahat berishadi. Sinovdan 3 soat oldin siydik chiqarishdan saqlanish kerak.
- Urogenital smear olish uchun, masalan, xlamidiya uchun PCR testi o'tkazilsa, ayollarga ham, erkaklarga ham 3 kun davomida jinsiy dam olish tavsiya etiladi. Tahlildan 2 hafta oldin antibakterial preparatlar qabul qilinmasligi kerak. Bir hafta davomida siz intim jellar, malhamlar, vaginal shamlar, dushdan foydalanishni to'xtatishingiz kerak. Tekshiruvdan 3 soat oldin siz siydik chiqarishdan bosh tortishingiz kerak. Hayz ko'rish paytida namuna olinmaydi, qon ketishi to'xtatilgandan 3 kun o'tgach, siz urogenital smear olishingiz mumkin.
homiladorlik davrida PCR
Chaqaloqni kutish davrida ko'plab jinsiy yo'l bilan yuqadigan infektsiyalar homilaning normal rivojlanishi uchun juda xavflidir. Jinsiy yo'l bilan yuqadigan kasalliklar intrauterin o'sishning kechikishi, abort yoki erta tug'ilish, bolaning tug'ma nuqsonlarini keltirib chiqarishi mumkin. Shuning uchun erta homiladorlik davrida PCR tekshiruvidan o'tish juda muhimdir. Ro'yxatdan o'tgandan keyin tahlildan o'tish kerak - 12 haftagacha.
Material maxsus cho'tka yordamida bachadon bo'yni kanalidan olinadi. Jarayon og'riqsizdir va chaqaloq uchun xavf tug'dirmaydi. Odatda homiladorlik davrida PCR usuli bilan xlamidiya, shuningdek ureaplazmoz, mikoplazmoz, sitomegalovirus, gerpes, papillomavirus uchun tahlil o'tkaziladi. Bunday tekshiruvlar majmuasi PCR-6 deb ataladi.
OIV tashxisi uchun PCR
Polimeraza zanjiri reaktsiyasi usuli tanadagi o'zgarishlarga va tashxis qo'yish shartlariga juda sezgir bo'lganligi sababli natijaga ko'plab omillar ta'sir qilishi mumkin. Shuning uchun OIV infektsiyasi uchun PCR tahlili ishonchli usul emas, uning samaradorligi 96-98% ni tashkil qiladi. Qolgan 2-4% hollarda test noto'g'ri ijobiy natijalar beradi.
Ammo ba'zi hollarda OIV PCR diagnostikasi ajralmas hisoblanadi. Odatda u noto'g'ri-salbiy Elishay natijasi bo'lgan odamlarga beriladi. Bunday ko'rsatkichlar odamda virusga qarshi antikorlar hali ishlab chiqilmaganligini ko'rsatadi va ularning soni bir necha marta ko'paymasdan aniqlanmaydi. Aynan shu narsaga PCR qon testini o'tkazish orqali erishish mumkin.
Bu diagnostika OIV bilan kasallangan onadan tug'ilgan hayotning birinchi yilidagi bolalar uchun ham zarur. Usul bolaning holatini ishonchli aniqlashning yagona usuli hisoblanadi.
Gepatit tashxisi uchun PCR
Polimeraza zanjiri reaktsiyasi usuli gepatit A, B, C virusining DNKsini infektsiyaga antikorlar paydo bo'lishidan yoki kasallik belgilari boshlanishidan ancha oldin aniqlash imkonini beradi. Gepatit C uchun PCR tahlili ayniqsa samaralidir, chunki 85% hollarda bu kasallik asemptomatik va kuzatilmaydi.o'z vaqtida davolash surunkali bosqichga o'tadi.
Qoʻzgʻatuvchini oʻz vaqtida aniqlash asoratlardan qochishga va uzoq muddatli davolanishga yordam beradi.
Kompleks PCR tekshiruvi
Kompleks PCR tahlili: bu nima? Bu polimer zanjirli reaktsiya usulidan foydalangan holda tekshirish bo'lib, u bir vaqtning o'zida bir nechta infektsiyalarni aniqlashni o'z ichiga oladi: mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, sitomegalovirus, ureaplasma urealiticum, 1 va 2 turdagi herpes, gonomall. Bunday diagnostikaning narxi 2000 dan 3500 rublgacha. klinikaga, ishlatiladigan materiallar va jihozlarga, shuningdek, tahlil turiga qarab: sifatli yoki miqdoriy. Sizning holatingizda nima kerak - shifokor hal qiladi. Ba'zi hollarda patogenning mavjudligini aniqlash kifoya, boshqalarda, masalan, OIV infektsiyasi bilan, miqdoriy titr muhim rol o'ynaydi. Yuqoridagi barcha patogenlarga tashxis qo'yishda tekshiruv "PCR-12 tahlili" deb ataladi.
Tahlil natijalari transkripti
PCR tahlilini dekodlash qiyin emas. Ko'rsatkichning faqat 2 ta shkalasi mavjud - "ijobiy natija" va "salbiy natija". Patogen aniqlanganda, shifokorlar kasallikning mavjudligini 99% ishonch bilan tasdiqlashlari va bemorni davolashni boshlashlari mumkin. Infektsiyani aniqlashning miqdoriy usuli bilan tegishli ustunda aniqlangan bakteriyalarning raqamli ko'rsatkichi ko'rsatiladi. Faqat shifokor kasallikning darajasini aniqlashi va kerakli davolanishni buyurishi mumkin.
Ba'zi hollarda, masalan, PCR orqali OIV infektsiyasini aniqlashda, salbiy natija bilan, olingan ko'rsatkichlarni tasdiqlash uchun qo'shimcha tekshiruvlar o'tkazish kerak bo'ladi.
Qaerda sinovdan o'tish kerak?
PZR testini qayerda topshirish kerak: davlat klinikasida yoki xususiy laboratoriyada? Afsuski, shahar tibbiyot muassasalarida asbob-uskunalar va usullar ko'pincha eskirgan. Shuning uchun zamonaviy asbob-uskunalar va yuqori malakali kadrlar bilan jihozlangan xususiy laboratoriyalarga ustunlik berish yaxshiroqdir. Bundan tashqari, xususiy klinikada natijalarni tezroq olasiz.
Moskvada ko'plab xususiy laboratoriyalar turli infektsiyalar uchun PCR tahlilini taklif qilishadi. Masalan, Vita, Kompleks klinika, Baxtli oila, Uro-Pro, PCR kabi klinikalarda tahlil qilinadi. Ekspertiza narxi 200 rubldan. bitta patogenni aniqlash uchun.
Xulosa qilish mumkinki, yuqumli kasalliklarni PCR yordamida tashxislash ko'p hollarda infektsiyaning dastlabki bosqichlarida organizmdagi patogenni aniqlashning tez va ishonchli usuli hisoblanadi. Ammo shunga qaramay, ba'zi hollarda, boshqa diagnostika usullarini tanlashga arziydi. Bunday tadqiqotga ehtiyoj borligini faqat mutaxassis aniqlay oladi. PCR tahlilini dekodlash ham professional yondashuvni talab qiladi. Shifokor tavsiyasiga amal qiling va kerak boʻlmagan testlarni oʻtkazmang.
