Kolorimetrik usul - tekshirilayotgan va ma'lum moddalarning rang to'yinganligini taqqoslashga asoslangan tahlil. Fizikaviy va kimyoviy testlar natijalari fanning ko'plab sohalari uchun katta ahamiyatga ega, ammo barcha tadqiqotlar asosan tibbiyotda qo'llaniladi.
Kolorimetrik usulning mohiyati
Maddalarning kimyoviy tarkibini aniqlaydigan ko'plab sinov turlari mavjud. Ulardan ba'zilari universal bo'lib, turli sohalarda keng qo'llaniladi, boshqalari o'ziga xos, yuqori aniqlik bilan. Kolorimetrik usul universaldir.
Tahlilning mohiyati shundan iboratki, konsentratsiyasi noma’lum bo’lgan eritmaning rangi to’yinganligi standart eritma rangi bilan taqqoslanadi. Tahlil paytida tekshirilayotgan komponentning ma'lum bir reaktiv bilan o'zaro ta'siri natijasida rangli birikma hosil bo'ladi. Reaktsiya tugagandan so'ng, hosil bo'lgan soya kontsentratsiyasi allaqachon ma'lum bo'lgan eritmalarning rangi bilan taqqoslanadi.
Kolorimetriyaning asoschisi Robert Boyl ekanligiga ishoniladi. U siqishni ishlatganeritmadagi temirni misdan ajratish uchun taninlar. Boyl eritmadagi temir kontsentratsiyasi qanchalik ko'p bo'lsa, uning tonusi shunchalik boy bo'lishini payqagan.
Kolorimetriya
Kolorimetriya - eritmalardagi moddaning miqdorini aniqlash usuli. Tahlil Buger-Lambert-Beer qonuniga asoslanadi: yorug'lik nuri moddaning zich yutuvchi qatlamiga tegsa, uning intensivligi zaiflashadi.
Moddaning kontsentratsiyasini aniqlashning kolorimetrik usuli rang intensivligini o'lchash uchun maxsus asboblar yordamida vizual taqqoslash yoki taqqoslashdan foydalanishi mumkin. Taqqoslash to'g'ridan-to'g'ri va kompensatsion tarzda amalga oshiriladi.
- Toʻgʻri. Usul suyuqlikning ma'lum bir zichligi va haroratida sinov eritmasining rang darajasini mos yozuvlar eritmasi bilan solishtirishni o'z ichiga oladi. Fotokolorimetr va spektrofotometrlardan foydalanilganda etalon eritma sifatida distillangan suv ishlatiladi. Qurilmalar yorug'lik intensivligiga bog'liq bo'lgan oqimning intensivligini o'lchaydi.
- Kompensatsiya. Usul o'rganilayotgan namunaning rangini mos yozuvlarga keltirishga asoslangan. Natijaga erituvchi qo'shish yoki bo'yalgan muhit qatlamining balandligini oshirish orqali erishiladi.
Spektorofotometr, monoxromator va boshqa nozik asboblardan foydalanish tadqiqotning allaqachon oddiy usulini yanada soddalashtiradi va natijalarning aniqligini oshirish imkonini beradi. Ushbu qurilmalar yorug'lik o'tkazuvchanligi miqdorini o'lchash va to'lqin uzunligini aniqlash imkoniyatiga ega.
Tahlil qoʻllaniladigan joy
Kolorimetrik tahlil usuli aniq kimyoviy tarkibi ma'lum bo'lganda, taqqoslash uchun mos yozuvlar namunasi mavjud bo'lganda va sinov va etalon namunaning harorati bir xil bo'lganda qo'llaniladi. Agar rangli moddaning miqdorini tezda aniqlash kerak bo'lsa, lekin u shunchalik kichikki, analitik usulni qo'llashning iloji bo'lmasa.
Kolorimetriya tibbiyotda klinik biokimyoviy tadqiqotlar va boshqa sohalarda keng qoʻllaniladi:
- farmatsevtika sanoati;
- oziq-ovqat va alkogol sanoati;
- agronomiya (tuproq sifatini aniqlash).
Ijobiy va kamchiliklar
Kolorimetrik usul, har qanday boshqa kabi, ijobiy va salbiy tomonlariga ega.
Afzalliklar quyidagilardan iborat:
- tahlil qilish qulayligi, minimal tayyorgarlik jarayonlari;
- kichik miqdordagi test materiali bilan ham sinovdan o'tkazish imkoniyati;
- qimmatbaho asbob-uskunalarga ehtiyoj qolmaydi, garchi so'nggi paytlarda arzon bo'lmagan zamonaviy qurilmalar tobora ko'proq foydalanilmoqda. Lekin ular eng aniq natijani beradi.
Kamchiliklari: analitik usullarga nisbatan tahlilning past aniqligi.
Proteinni aniqlash uchun biuret usuli
Qon zardobidagi oqsil gomeostaz holatini aks ettiruvchi ko'rsatkichdir. Qondagi makromolekulyar birikma kontsentratsiyasining oshishi giperproteinemiya, past miqdori esa gipoproteinemiya deb ataladi.
Oqsillarqon zardobi boshqa tarkibga, tuzilishga, xususiyatlarga ega, turli funktsiyalarni bajaradi. Ular fermentlar, gormonlar, immunoglobulinlar va boshqalarga bo'linadi. Oqsillarning barcha guruhlari bir qator umumiy xususiyatlarga ega bo‘lib, ular asosida biologik suyuqliklardagi makromolekulyar organik birikmalarni aniqlash usullari ishlab chiqilgan.
Klinik biokimyodagi barcha usullardan oqsilni aniqlashning kolorimetrik usullari ko'proq qo'llaniladi. Ular nisbatan arzon, bu byudjet tashkilotlari uchun muhimdir. va juda oddiy. Eng keng tarqalgan biuret usuli hisoblanadi. Usulning mohiyati: gidroksidi muhitdagi oqsillar mis sulfat bilan reaksiyaga kirishib, binafsha rangli birikmalar hosil qiladi. Qondagi oqsil miqdori binoni to'yinganligi bilan belgilanadi. Tahlil qilish uchun biomaterial ertalab och qoringa olinadi.
Tahlil juda aniq, ammo qondagi oqsil kontsentratsiyasiga ta'sir qiluvchi omillar mavjud:
- biomaterial namuna olishdan biroz oldin jismoniy faollik;
- homiladorlik va laktatsiyaning oxirgi haftalari;
- kortikotropin, Miscleron, Clofibrate preparatlarini qo'llash qondagi oqsil miqdorini oshiradi va Pirazinamid va estrogenni qo'llash - konsentratsiyani kamaytirish uchun;
- biomaterialdan namuna olishda qoʻlning notoʻgʻri joylashishi.
Temirni aniqlash
Qondagi temir miqdori turli kasalliklarni tashxislashda asosiy ko'rsatkichlardan biridir. Ushbu modda gemoglobinda to'plangan bo'lib, u kislorodni to'qimalarga tashishni ta'minlaydi. Uchuntemirni kolorimetrik usulda aniqlashda asosiy reagent sifatida ko'pincha batofenantrolin eritmasi (0,02%) ishlatiladi. Biomaterial - gemoliz izlarisiz sarum.
Usulning mohiyati: temir ionlari va sulfatlangan batofenantrolinning o'zaro ta'siri rangli kompleks hosil qiladi, uning to'yinganligi fotometrik tarzda aniqlanadi. Aniq eritmani olish uchun biomaterialdan namuna olish qoidalariga rioya qilish kerak, ammo temir-ligand komplekslarining optik zichligini aniq aniqlash uchun gidroksilamin va deterjanlar (natriy dodesil sulfat) yordamida temir gemoglobindan chiqariladi. Sinov natijasi patologiyaning mavjudligi va darajasini aniqlaydi. Oddiy temir konsentratsiyasi bo'lishi kerak:
- 14, 2 – 26,0 mkmol/L (erkaklar);
- 10, 6- 21, 7 mkmol/L (ayollar).
Temir tanqisligi odatda qon yoʻqotish, oziq-ovqatni notoʻgʻri qabul qilish yoki oshqozon-ichak traktidan yomon soʻrilish bilan bogʻliq.
Xolesterin testi
Xolesterin - bu ko'plab organizmlarning, jumladan, odamlarning hujayra devorida joylashgan organik modda. Bu xolekalsiferol va steroid gormonlarini ishlab chiqarish uchun zarurdir. 3,37-5,2 mmol / L xolesterin darajasi normal hisoblanadi. Ko'tarilgan tarkib aterosklerozning asosiy sabablaridan biridir.
Xolesterinni aniqlashning kolorimetrik usullari qon tomir kasalliklarini erta bosqichda aniqlash imkonini beradi. Ishemiyaning o'limga olib keladigan patoanatomik natijalariga ko'ra, bemorlarda lipofil spirtning konsentratsiyasi.6,5-7,8 mmol/L edi.
Kolorimetrik usulning printsipi shundaki, xolesterin 3beta-gidroksi-steroid oksidoreduktaza ta'sirida oksidlanib, p-aminoatipirinni rangli birikmaga aylantiruvchi vodorod peroksidni chiqaradi. Xolesterin miqdori uning rangining to'yinganligi bilan belgilanadi.
Bolada test o'tkazishda, bolalik davrida xolesterin konsentratsiyasi 4,1 mmol / l dan oshmasligi kerakligini hisobga olish kerak.
Enzimatik kolorimetrik usul nima?
Enzimatik testlar yuqori faollikka ega fermentlarning reaksiyalaridan foydalanishga asoslangan. Ular analitik kimyoda turli moddalarni aniqlash uchun keng qo'llaniladi - nitrat ionlaridan tortib makromolekulalargacha.
Enzimatik (fermentativ) usullar o'ziga xos bo'lib, ayrim moddalarni tarkibiga o'xshash boshqa moddalar ishtirokida tahlil qilish imkonini beradi. Fermentdan foydalanishga asoslangan eng keng tarqalgan usullar - glyukoza oksidaza. Sinov qondagi glyukoza kontsentratsiyasini aniqlash uchun ishlatiladi. Sinovning aniqligi uni 2-toifa qandli diabet bilan og'rigan bemorlarda gipoglikemik vositalarning dozasini sozlash uchun foydalanish imkonini beradi.
Glyukoza oksidlovchi usuli glyukozani aniqlashning eng yaxshi miqdoriy usullaridan biri hisoblanadi. Biyomaterial sifatida qon (kapillyar) ham, sarum ham ishlatilishi mumkin, ammo plazma afzalroqdir, chunki u past gematokritga ega, bu esa natijaning aniqligiga salbiy ta'sir qiladi.
Fotometriyaning kinetik usulidan asosan foydalaniladi. Uning mohiyati shundan iboratkiglyukoza oksidaza va peroksidazaning belgilangan nisbati, reaksiya boshlanganidan keyin ma'lum vaqt davomida rangli birikma hosil bo'lish tezligi namunadagi glyukoza darajasiga mutanosib bo'ladi. Sinovning asosiy afzalligi shundaki, natijaga namunadagi uchinchi tomon birikmalarining mavjudligi ta'sir qilmaydi. Usulning kamchiliklari ham bor - sinov uchun nemis yoki shved ishlab chiqaruvchilarining qimmat o'lchov asboblari talab qilinadi.
Xulosa
Kolorimetrik usul aniq va ishlatish uchun qulay. Uning tibbiyotda qo‘llanilishi organizmdagi turli patologik o‘zgarishlarni erta aniqlash imkonini beradi. Yangi texnologiyalarning joriy etilishi bilan usul takomillashtirilmoqda va tobora ommalashib bormoqda.
