Ko'pgina oziq-ovqat mahsulotlarining sifat tarkibini aniqlash uchun protein uchun ksantoprotein reaktsiyasi qo'llaniladi. Murakkabda aromatik aminokislotalarning mavjudligi sinov namunasiga ijobiy rang o'zgarishini beradi.
Protein nima
Uni tirik organizm uchun qurilish materiali hisoblangan oqsil ham deyiladi. Proteinlar mushaklar hajmini saqlab turadi, sochlar, teri yoki ligamentlar bo'ladimi, turli organlarning shikastlangan va o'lik to'qimalari tuzilmalarini tiklaydi. Ularning ishtirokida qizil qon tanachalari ishlab chiqariladi, ko'plab gormonlar va immun tizimining hujayralarining normal ishlashi tartibga solinadi.
Bu murakkab molekula boʻlib, massasi 6103 d altondan kattaroq polipeptiddir. Protein tuzilishi peptid bog'i bilan bog'langan ko'p miqdorda aminokislota qoldiqlaridan hosil bo'ladi.
Protein tuzilishi
Bu moddalarning past molekulyar og'irlikdagi peptidlarga nisbatan o'ziga xos xususiyati ularning turli xil ta'sirlar bilan mustahkamlangan rivojlangan fazoviy uch o'lchovli tuzilishidir.jalb qilish darajasi. Proteinlar to'rt darajali tuzilishga ega. Ularning har biri oʻziga xos xususiyatlarga ega.
Ularning molekulalarining birlamchi tashkil etilishi aminokislotalar ketma-ketligiga asoslanadi, uning tuzilishi oqsilga ksantoprotein reaktsiyasi bilan tan olinadi. Bunday struktura vaqti-vaqti bilan takrorlanadigan peptid bog'i -HN-CH-CO- bo'lib, aminokarboksilik kislotalardagi yon zanjir radikallari selektiv qismdir. Aynan ular kelajakda butun moddaning xususiyatlarini aniqlaydilar.
Birlamchi oqsil strukturasi etarlicha kuchli deb hisoblanadi, bu peptid bog'lanishlarida kuchli kovalent o'zaro ta'sirlarning mavjudligi bilan bog'liq. Keyingi darajalarning shakllanishi dastlabki bosqichda o'rnatilgan belgilarga qarab sodir bo'ladi.
Ikkilamchi strukturaning hosil boʻlishi aminokislotalar ketma-ketligining spiralga aylanishi tufayli mumkin boʻladi, bunda aylanishlar orasida vodorod bogʻlari oʻrnatiladi.
Molekulaning uchinchi darajali tashkiliy darajasi spiralning bir qismi boshqa bo'laklarga o'rnatilganda, ular o'rtasida vodorod, disulfid, kovalent yoki ion birikmalari bilan har xil turdagi bog'lanishlar paydo bo'lganda hosil bo'ladi. Natijada globulalar shaklidagi assotsiatsiyalar paydo bo'ladi.
Uchlamchi tuzilmalarning fazoda joylashishi ular oʻrtasida kimyoviy bogʻlanish hosil boʻlishi molekulaning yakuniy shakli yoki toʻrtlamchi daraja hosil boʻlishiga olib keladi.
Aminokislotalar
Ular oqsillarning kimyoviy xossalarini aniqlaydi. 20 ga yaqin asosiy aminokislotalar mavjud,turli ketma-ketlikda polipeptidlar tarkibiga kiradi. Bunga asosiy peptidlarning hosilalari boʻlgan gidroksiprolin va gidroksilizin koʻrinishidagi noyob aminokarboksilik kislotalar ham kiradi.
Oqsilni tanib olishning ksantoprotein reaktsiyasining belgisi sifatida alohida aminokislotalarning mavjudligi reagentlar rangining o'zgarishini beradi, bu ularning tarkibida o'ziga xos tuzilmalar mavjudligini ko'rsatadi.
Ma'lum bo'lishicha, ularning barchasi karboksilik kislotalar bo'lib, ularda vodorod atomi aminokislotalar bilan almashtirilgan.
Molekula tuzilishiga misol qilib, eng oddiy aminokislota sifatida glitsinning (HNH− HCH− COOH) struktur formulasini keltirish mumkin.
Unda CH2- vodorodlardan biri uglerod uzunroq radikal, jumladan benzol halqasi, amino, sulfo, karboksi guruhlari bilan almashtirilishi mumkin.
Ksantoprotein reaktsiyasi nimani anglatadi
Sifatli oqsil tahlili uchun turli usullar qo'llaniladi. Bunga reaksiyalar kiradi:
- binafsha rangdagi biuret;
- ningidrin koʻk-binafsha rangli eritma hosil qiladi;
- qizil bo'yalgan formaldegid;
- Kulrang-qora sedimentatsiyali folga.
Har bir usulni bajarishda oqsillar mavjudligi va ularning molekulasida ma'lum bir funktsional guruh mavjudligi isbotlanadi.
Oqsilga ksantoprotein reaktsiyasi mavjud. U Mulder testi deb ham ataladi. Bu oqsillardagi rang reaktsiyalariga ishora qiladi, inaromatik va geterotsiklik aminokislotalardir.
Bunday testning xususiyati siklik aminokislota qoldiqlarini nitrat kislota bilan nitrlash jarayoni, xususan, benzol halqasiga nitroguruh qo'shilishidir.
Ushbu jarayon natijasida choʻkma hosil boʻladigan nitro birikma hosil boʻladi. Bu ksantoprotein reaktsiyasining asosiy belgisidir.
Qanday aminokislotalar aniqlanadi
Ushbu test yordamida barcha aminokarboksilik kislotalarni aniqlash mumkin emas. Proteinni tanib olishning ksantoprotein reaktsiyasining asosiy xususiyati aminokislotalar molekulasida benzol halqasi yoki geterotsikl mavjudligidir.
Oqsil aminokarboksilik kislotalardan ikkita aromatik kislota ajratib olinadi, ularda fenil guruhi (fenilalaninda) va gidroksifenil radikali (tirozinda) mavjud.
Ksantoprotein reaktsiyasi aromatik indol yadrosiga ega bo'lgan geterotsiklik aminokislota triptofanni aniqlash uchun ishlatiladi. Proteinda yuqoridagi birikmalarning mavjudligi sinov muhitining xarakterli rangi o'zgarishini beradi.
Qanday reagentlar ishlatiladi
Ksantoprotein reaktsiyasini amalga oshirish uchun siz tuxum yoki o'simlik oqsilining 1% li eritmasini tayyorlashingiz kerak.
Odatda oqsilni sarig'idan ajratish uchun sindirilgan tovuq tuxumidan foydalaning. Eritmani olish uchun 1% protein o'n barobar miqdorda tozalangan suvda suyultiriladi. Proteinni eritib bo'lgach, hosil bo'lgan suyuqlik bir necha qatlamli doka orqali filtrlanishi kerak. Bu eritma salqin joyda saqlanishi kerak.
Reaksiyani o'simlik oqsili bilan amalga oshirishingiz mumkin. Eritmani tayyorlash uchun bug'doy uni 0,04 kg miqdorida ishlatiladi. 0,16 l tozalangan suv qo'shing. Ingredientlar idishga aralashtiriladi, u 24 soat davomida sovuq joyda + 1 ° C haroratda joylashtiriladi. Bir kundan keyin eritma chayqatiladi, shundan so'ng u avval paxta momig'i, so'ngra qog'ozli qatlamli filtr bilan filtrlanadi. Olingan suyuqlik sovuq joyda saqlanadi. Bunday eritmada asosan albumin fraktsiyasi mavjud.
Ksantoprotein reaksiyasini amalga oshirish uchun asosiy reaktiv sifatida konsentrlangan nitrat kislota ishlatiladi. Qo'shimcha reagentlar 10% natriy gidroksid yoki ammiak eritmasi, jelatin eritmasi va konsentratlanmagan fenoldir.
Metodologiya
Toza probirkaga tuxum oqsilining 1% li eritmasi yoki 2 ml hajmdagi un qo`shing. Yoriqlar tushishini to'xtatish uchun unga taxminan 9 tomchi konsentrlangan nitrat kislota qo'shiladi. Olingan aralash isitiladi, natijada cho'kma sarg'ayadi va asta-sekin yo'qoladi va uning rangi eritmaga o'tadi.
Suyuqlik soviganida devor boʻylab probirkaga taxminan 9 tomchi konsentrlangan natriy gidroksid qoʻshiladi, bu jarayon uchun ortiqcha boʻladi. Muhitning reaktsiyasi ishqoriy bo'ladi. Naycha ichidagilar to‘q sariq rangga aylanadi.
Xususiyatlar
Ksantoprotein oqsillarga sifatli reaksiya deb ataladinitrat kislota ta'sirida, keyin sinov kiritilgan dudbo'ron ostida amalga oshiriladi. Konsentrlangan kaustik moddalar bilan ishlashda barcha xavfsizlik choralariga rioya qiling.
Isitish jarayonida trubaning tarkibi tashqariga chiqishi mumkin, buni ushlagichga mahkamlashda va moyillikni tanlashda hisobga olish kerak.
Konsentrlangan nitrat kislota va natriy gidroksidni qabul qilish faqat shisha pipetka va rezina lampochka bilan amalga oshirilishi kerak, og'iz orqali terish taqiqlanadi.
Fenol bilan qiyosiy reaksiya
Jarayonni tasvirlash va fenil guruhi mavjudligini tasdiqlash uchun shunga o'xshash sinov gidroksibenzol bilan o'tkaziladi.
Probirkaga 2 ml suyultirilgan fenol soling, so’ngra asta-sekin devor bo’ylab 2 ml konsentrlangan nitrat kislota qo’shing. Eritma isitishga duchor bo'ladi, buning natijasida u sarg'ayadi. Bu reaksiya benzol halqasining mavjudligi uchun sifatli hisoblanadi.
Gidroksibenzolni nitrat kislota bilan nitrlash jarayoni 15 dan 35 gacha foiz nisbatda paranitrofenol va ortonitrofenol aralashmasi hosil boʻlishi bilan kechadi.
Jelatin solishtirish
Oqsilga ksantoprotein reaktsiyasi faqat aromatik tuzilishga ega aminokislotalarni aniqlashini isbotlash uchun fenolik guruhga ega boʻlmagan oqsillardan foydalaniladi.
Toza probirkaga 2 ml hajmdagi 1% jelatin eritmasini kiriting. Unga taxminan 9 tomchi konsentrlangan nitrat kislota qo'shiladi. Olingan aralash isitiladi. Eritma sarg'aymaydi, bu yo'qligini isbotlaydiaromatik tuzilishga ega aminokislotalar. Muhitning ozgina sarg'ayishi ba'zida oqsil aralashmalari mavjudligi sababli kuzatiladi.
Kimyoviy tenglamalar
Ksantoproteinlarning oqsillarga reaktsiyasi ikki bosqichda sodir bo'ladi. Birinchi bosqich formulasi konsentrlangan nitrat kislota yordamida aminokislota molekulasini nitrlash jarayonini tavsiflaydi.
Nitrotirozin va dinitrotirozin hosil qilish uchun tirozinga nitroguruh qoʻshilishi misol boʻla oladi. Birinchi holda, benzol halqasiga bitta NO2-radikal biriktiriladi, ikkinchi holatda ikkita vodorod atomi NO2 bilan almashtiriladi.. Ksantoprotein reaktsiyasining kimyoviy formulasi nitrotirozin molekulasini hosil qilish uchun tirozinning nitrat kislota bilan o'zaro ta'sirida ifodalanadi.
Nitratlanish jarayoni rangsiz rangning sariq rangga oʻtishi bilan kechadi. Triptofan yoki fenilalaninning aminokislota qoldiqlarini o'z ichiga olgan oqsillar bilan shunga o'xshash reaktsiyani amalga oshirganda, eritmaning rangi ham o'zgaradi.
Ikkinchi bosqichda tirozin molekulasining nitrlanish mahsulotlari, xususan nitrotirozin ammoniy yoki natriy gidroksid bilan o'zaro ta'sir qiladi. Natijada sariq-to'q sariq rangga ega natriy yoki ammoniy tuzi olinadi. Bu reaksiya nitrotirozin molekulasining xinoid shaklga o'tish qobiliyati bilan bog'liq. Keyinchalik undan nitronik kislota tuzi hosil bo'lib, u qo'sh konjugatsiyalangan bog'larning xinon tizimiga ega.
Ksantoproteinlarning oqsillarga reaktsiyasi shu tariqa tugaydi. Ikkinchi tenglamabosqich yuqorida keltirilgan.
Natijalar
Uchta probirkadagi suyuqliklarni tahlil qilishda suyultirilgan fenol etalon eritma sifatida xizmat qiladi. Benzol halqali moddalar nitrat kislota bilan sifatli reaksiya beradi. Natijada, eritma rangi o'zgaradi.
Ma'lumki, jelatin gidrolizlangan kollagenni o'z ichiga oladi. Bu protein tarkibida aromatik aminokarboksilik kislotalar mavjud emas. Kislota bilan oʻzaro taʼsirlashganda muhit rangi oʻzgarmaydi.
Uchinchi probirkada oqsillarga ijobiy ksantoprotein reaktsiyasi kuzatiladi. Xulosa quyidagicha bo'lishi mumkin: aromatik tuzilishga ega bo'lgan barcha oqsillar, xoh u fenil guruhi yoki indol halqasi bo'lsin, eritmaning rangi o'zgarishini beradi. Bu sariq nitro birikmalarining hosil bo'lishi bilan bog'liq.
Rang reaksiyasini amalga oshirish aminokislotalar va oqsillarda turli xil kimyoviy tuzilmalar mavjudligini isbotlaydi. Jelatin misoli uning tarkibida fenil guruhi yoki siklik tuzilishga ega bo'lmagan aminokarboksilik kislotalar mavjudligini ko'rsatadi.
Ksantoprotein reaktsiyasi kuchli nitrat kislota qo'llanilganda terining sarg'ayishini tushuntirishi mumkin. Sut ko'pikini bunday tahlil qilishda sut bir xil rangga ega bo'ladi.
Tibbiy laboratoriya amaliyotida bu rang namunasi siydikdagi oqsilni aniqlash uchun ishlatilmaydi. Bu siydikning sariq rangi bilan bog'liq.
Ksantoprotein reaktsiyasi turli oqsillardagi triptofan va tirozin kabi aminokislotalar miqdorini aniqlash uchun tobora ko'proq foydalanilmoqda.
